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上海莼試生物技術(shù)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第2年

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ELISA試劑盒
ATCC細(xì)胞
細(xì)胞
蛋白
生化試劑
標(biāo)準(zhǔn)品
擔(dān)體
中國藥典標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
IBL試劑盒
*原時(shí)間試劑
血清
肉類及相關(guān)產(chǎn)品 實(shí)驗(yàn)室耗材系列 細(xì)胞系列 抗體純化試劑 單抗、多抗研制用材料 細(xì)胞培養(yǎng)用材料和試劑 免疫分析相關(guān)試劑 免疫分析科研試劑盒 抗體純化試劑盒 抗血清系列 動(dòng)物血漿系列 熱滅活血清系列 碳吸附過濾血清系列 培養(yǎng)細(xì)菌專用血清系列 動(dòng)物血清系列(pet瓶) HRP標(biāo)記抗原 天然純化抗原 動(dòng)物Ig類抗原 基因重組抗原 膠體金標(biāo)記一抗(多抗為抗原親和純化,單抗為G或A蛋白親和純化 ) HRP標(biāo)記二抗(抗原親和純化) HRP標(biāo)記一抗(多抗為抗原親和純化,單抗為G或A蛋白親和純化) 多克隆抗體二抗/PcAb(未標(biāo)注的為G或A蛋白親和純化) 多克隆抗體一抗/PcAb(未標(biāo)注的為G或A蛋白親和純化) 單克隆抗體二抗/McAb(G或A蛋白親和純化) 單克隆抗體一抗/McAb(G或A蛋白親和純化) 裂解血 抗凝動(dòng)物血系列 脫纖維動(dòng)物血系列 無菌過濾動(dòng)物血清系列 輻照滅菌動(dòng)物血清系列 無菌采制動(dòng)物血清系列
科研抗體
PCR試劑盒
科研細(xì)胞
細(xì)胞生物學(xué)試劑

ELISA試劑盒操作流程

時(shí)間:2016/5/16閱讀:352
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ELISA試劑盒操作流程如下:
 (1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。 

 (2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
 (3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
 (4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
 (5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
 (6)洗板,同(4)。
 (7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
 (8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
 (9)洗板,同(4)。
 (10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
 (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
 (12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。ELISA試劑盒
 (13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
注:所用溶液配方
 (1) PBS:稱取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP04?12H20、8.0g NaCl, 0.2g KCl,加雙蒸水至1000ml。
 (2)包被緩沖液:稱取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3,加雙蒸水至 1000m1。
 (3)洗滌液(PBST):含0.05% Tween-20的PBS。
 (4)稀釋液:含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS,主要用以稀釋抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、樣品。
 (5)TMB顯色液:稱取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g檸檬酸,加雙蒸水至1O0ml,配成檸檬酸-磷酸緩沖溶液。用10.5 ml 檸檬酸-磷酸緩沖溶液溶解1錠TMB,再加入35μl 3% H2O2
 (6)細(xì)胞裂解液:1% TritonX-100,137mmol/L NaCl,20mmol/L Tris-HCl,2mmol/L EDTA,1mmol/L PMSF,pH 7.4。(其中PMSF溶于異丙醇中,配成1O mmo/L,-20℃ 貯存?zhèn)溆谩?br />ELISA試劑盒

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