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上海酶聯(lián)生物研究所


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48T人抗胰島素受體抗體ELISA 檢測試劑盒

閱讀:177發(fā)布時間:2013-04-15

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    上海酶聯(lián)生物研究所

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          本試劑僅供研究使用 標本:血清或血漿

人抗胰島素受體抗體ELISA 檢測試劑盒試驗原理:
    AIRA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知AIRA濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將AIRA和*標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中AIRA的濃度呈比例關(guān)系。
          
自備材料
蒸餾水。
加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

     人抗胰島素受體抗體ELISA 檢測試劑盒樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。


操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。


局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。

    人抗胰島素受體抗體ELISA 檢測試劑盒試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的AIRA標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的AIRA含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍:0-80U/ml

4、敏感度: 0.1 U/ml

 

DAC1021-0.1ml Rabbit anti-horse IgG/AP 堿性磷酸酶標記兔抗馬IgG 0.1ml 0
DAF1015-0.3ml Goat anti-rat IgG/FITC 熒光素標記羊抗大鼠IgG 0.3ml 0
DAC1027-0.1ml Rabbit anti-mouse IgG/AP 堿性磷酸酶標記兔抗小鼠IgG 0.1ml 0
DAC1029-0.1ml Rabbit anti-pig IgG/AP 堿性磷酸酶標記兔抗豬IgG 0.1ml 0
DAC1033-0.1ml Rabbit anti-Guinea IgG/AP 堿性磷酸酶標記兔抗豚鼠IgG 0.1ml 0
DAC1037-0.1ml bovine-BSA/AP 堿性磷酸酶標記標記牛血清白蛋白 0.1ml 0
DAB1002-1ml Goat anti-human IgG/Biotin *化羊抗人IgG 1ml 0
DAY1054-0.1ml dog IgG/Cy3 熒光素Cy3標記狗IgG 0.1ml 0
     人抗胰島素受體抗體ELISA 檢測試劑盒DAY1061-0.1ml human IgG/Cy3 熒光素Cy3標記人IgG 0.1ml 0
DAY1064-0.1ml Monkey IgG/Cy3 熒光素Cy3標記猴IgG 0.1ml 0
DAY1071-0.1ml Rat IgM/Cy3 熒光素Cy3標記大鼠IgM 0.1ml 0
DAB1004-0.1ml Goat anti-mouse IgG/Biotin *化羊抗小鼠IgG 0.1ml 0
DAB1007-0.1ml Goat anti-Rabbit IgG/Biotin *化羊抗兔IgG(H+L) 0.1ml 0
DAB1009-0.1ml Goat anti-Chicken IgG/Biotin *化羊抗雞IgG 0.1ml 0
DAB1013-0.1ml Mouse anti-human IgG/Biotin *化小鼠抗人IgG 0.1ml 0
DAY1077-0.1ml HSA /Cy3 熒光素Cy3標記* 0.1ml 0
DAF1018-0.3ml Mouse anti-goat IgG/FITC 熒光素標記小鼠抗羊IgG 0.3ml 0
DAF1021-0.3ml Mouse anti-rabbit IgG/FITC 熒光素標記小鼠抗兔IgG 0.3ml 0
 


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