人皰疹病毒 8 型 PCR 試劑盒說明書
【產(chǎn)品名稱】
商品名稱：人皰疹病毒 8 型 PCR 試劑盒
Name ：Human Herpesvirus-8 (HHV-8) PCR Kit
【包裝規(guī)格】50 次/盒
【產(chǎn)品及特點(diǎn)】
人皰疹病毒 8 型(Human Herpesvirus-8,HHV-8)是從淋巴增生性疾
病和艾滋病患者淋巴細(xì)胞中培養(yǎng)獲得的一種新病毒，可通過唾液飛沫及密
切接觸（如接吻，共用餐、飲器具等）、輸血傳播。除免疫低
下（如先天性免疫缺陷、艾滋病、長期服用免疫抑制劑等）外，絕大多數(shù)
人感染后終身都不會(huì)產(chǎn)生明顯癥狀；免疫低下者，如 HIV 感染者，當(dāng)人
體特異性免疫被削弱至一定程度時(shí)， 潛伏的病毒可被激活并產(chǎn)生急性感
染癥狀，此時(shí)會(huì)出現(xiàn)間質(zhì)性肺炎、腦炎、腦膜炎、肝炎及多器官衰竭等癥
狀，活化的病毒可大規(guī)模感染 T 淋巴細(xì)胞，使免疫功能進(jìn)一步削弱，該
病毒對(duì)人體健康有較大影響，因此檢測人皰疹病毒 8型 DNA 具有重要意
義。本產(chǎn)品就是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的、檢測此病毒的試劑盒。本產(chǎn)品具
有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供病毒 DNA 模板。
2.引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增人皰疹病毒8 型病毒 DNA，與
其他病毒沒有交叉反應(yīng)。
3.提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4.PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
5.本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
【規(guī)格及成分】
成 份 編號(hào) 十孔盒包裝
PCR MagicMix 3.0 63981 1 mL（紅蓋）
超純水 109350 1 mL（亮黃色）
人皰疹病毒 8型 PCR 引物混合液 3026yw 100 μL（白蓋）
人皰疹病毒 8 型 PCR 陽性對(duì)照
（1×10E8 拷貝/μL）
93981-3026pc 50 μL（黃蓋）
【運(yùn)輸及保存】
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。人皰疹病毒 8 型 PCR 陽性對(duì)
照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。
【自備試劑】
樣品 DNA。
【使用方法】
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA
提取試劑盒兼容。
2.如果有 N 個(gè)樣品，則需做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對(duì)照和
一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽性對(duì)照是人皰疹病毒8 型 PCR 陽性
對(duì)照的 1000 倍稀釋液，其總體積等于試劑盒所需的樣品量，樣品制備陰
性對(duì)照是直接用水。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）
3.對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰
性對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成
分：
成分
N+2 個(gè)
樣品管
PCR 陰性
對(duì)照
PCR 陽性
對(duì)照
PCR Magic Mix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL
人皰疹病毒 8 型通用 PCR 引物混
合液
各 2 μL 2 μL 2 μL
N+2 個(gè)樣品 DNA 模板 各 18 μL - -
PCR 陰性對(duì)照（水） - 18 μL -
PCR 陽性對(duì)照（人皰疹病毒 6 型通
用 PCR 陽性對(duì)照的 1000 倍稀釋
液）
- - 18 μL
4.按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng): 過程 溫度 時(shí)間
預(yù)變性 95℃ 5 min
PCR 反應(yīng)
（35 個(gè)循環(huán)）
95℃ 15 sec
55℃ 15 sec
82℃ 30 sec 最后延伸 82℃ 10 min 三、電泳檢測
5.取 5μL PCR 產(chǎn)物電泳進(jìn)行檢測。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束
后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長
度為 481bp。陽性對(duì)照必須有此條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否
則實(shí)驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增
以排除 PCR 抑制劑的感染。
