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HA干擾的消除措施
由于標本中HA的來源是未知的,不能夠準確的針對HA的結合位點進行操作,目前尚未有一個*消除HA干擾的方法。以下就現有的消除HA的方法進行分述。
稀釋法
如果樣本HA濃度含量不是很高,且它所造成的干擾不是很大時,稀釋法是可以減少它的干擾,但不能*消除。據報道,稀釋法對使用AxSYM 測定HCG中受到HA的干擾具有很好的消除作用,因為在它的稀釋液中已經含有一定量低濃度的動物蛋白來吸附HA。在對其樣本稀釋后,降低了HA的濃度,在低濃度動物蛋白來吸附HA后,原有的干擾強度可明顯減小。
使用異嗜性抗體阻滯劑、阻斷試劑盒或阻斷試管
目前市場上已經有商品化的阻斷劑如:IIR、NS-ABT、HBR、Heteroblock、MAB33 及polyMAB33。將它們加入待測的樣品中,利用非特異性和特異性阻斷劑與HA結合從而達到減少干擾的目的。消除干擾的效果通常由干擾物的濃度、類別或亞類,以及阻斷劑的類別和分型所決定。如,奧林巴斯公司在對鐵蛋白檢測時,用F(ab’)2 相關試劑提前處理待測樣本可在一定程度上消除HA的干擾。異嗜性阻斷試劑盒現在已廣泛使用。其內部特制的免疫球蛋白,可用于中和免疫測定法中產生干擾的HA。HA阻斷試劑對預防假陽性的HCG結果有很好的效果,但添加鼠免疫球蛋白對預防假陽性的HCG結果無影響。又如使用HA阻斷試管。使用貝克曼化學發光免疫法測定檢測如游離PSA特異性抗原等項目時,樣本在檢測前用HBT處理,大大減少了假陽性的發生率。抗體
提取法
可以采用吸附在氟乙烯表面的鼠McAb,固相結合在瓊脂糖凝膠柱上的蛋白G或者蛋白A去提取HA的方法、三氟乙酸沉淀法、巰基試劑法、陽離子交換劑和親和層析等方法,均對消除HA有一定效果。但不宜使用熱或酸處理來滅活血清中的HA,因為大多數的分析物都不穩定。
利用活體*單鏈抗體作為捕獲試劑
使用活體*單鏈抗體作為捕獲抗體用于固相抗原的測定技術可以在一定程度上有效地避開HA的干擾。將活體*單鏈抗體作為捕獲抗體結合到固相的抗原上,再加入已經用標記的親和素結合到*上,形成固相抗原-活體*單鏈抗體-標記親和素復合物,由于*與親和素的結合為高度特異的結合,故可較有效地避開HA的干擾。此外,在活體*單鏈抗體與固相抗原發生特異性的反應結合過程中,即使樣本里存在有HA,它以Fab-Fab的結合模式結合到過剩的*單鏈抗體試劑上,zui終也只能被沖洗清除,從而使測定在一定程度上避開HA的干擾。
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